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[试剂耗材] 如何高效快捷的提取外泌体中的RNA?

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发表于 2019-4-23 17:03:41 | 显示全部楼层 |阅读模式
外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm),现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。
外泌体RNA可以作为包括癌症在内的各种疾病的生物标志物。在体液和细胞培养基中发现的另一种RNA是自由循环RNA (fc-RNA)。
这些fc RNA通常是蛋白质结合RNA,在细胞凋亡或坏死过程中从细胞中泄漏。

                               
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如何提取外泌体中的RNA呢?艾美捷比较推荐Norgen Biotek的外泌体RNA提取试剂盒:Exosomal RNA Isolation Kit  58000;该试剂盒仅用于使用Norgen的外泌体提纯试剂盒提取纯化的外泌体的RNA的提取。其特色与优势如下:
1. 分离所有大小的外泌体和细胞外囊泡RNA,包括microRNA;
2. 结合并洗脱所有RNA,无论大小或GC含量如何,无偏差;
3. 没有苯酚提取物;
4. 没有蛋白酶K处理;
5. 没有载体RNA;
6. 将分离的RNA浓缩至灵活的洗脱体积,范围为50μL至100μL;
7. 在15-20分钟内纯化高质量的RNA。
使用Norgen试剂盒从不同体积尿液中纯化的外泌体中提取RNA,并使用RT-qPCR扩增,结果如下:

                               
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随着样本输入量的增加,尿液外泌体miR-30a呈线性下降。尿液外泌体miR-30a的相对数量显示出良好的线性,其回收率百分比超过90%。
使用Norgen试剂盒从不同体积血浆中纯化的外泌体中提取RNA,并使用RT-qPCR扩增,结果如下:

                               
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随着样本输入量的增加,血浆外泌体miR-26a呈线性下降。血浆外泌体miR-26a的相对数量显示出良好的线性,其回收率百分比超过90%。
外泌体RNA提取试剂盒精彩文章鉴赏:
Extracellular microRNA signature in chronic kidney disease.American Journal of Physiology. 2017.


                               
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