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[仪器设备] 解决多重PCR痛点,试用一步法多重PCR试剂盒

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发表于 2019-4-17 20:07:42 | 显示全部楼层 |阅读模式
一般PCR仅应用一对引物,通过PCR扩增产生一个核酸片段,主要用于单一致病因子等的鉴定,多重PCR是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应。多重PCR和在很多应用中有巨大的优势,深受分子诊断领域研究者与开发者的喜爱。
目前多重PCR面临着一些问题:
1.PCR通常需要充分优化退火条件,以便对不同的引物–模板系统实现最高效率的扩增。这种类型的PCR经常受到非特异性PCR产物的影响。严格的热启动程序和特别优化的缓冲溶液系统对于成功的多重PCR绝对是非常关键的。
2.多重PCR所面对的另外一个挑战是,不同的引物对之间,杂交动力学性质不同。结合效率更高的引物能更充分的利用PCR反应试剂,从而导致其它PCR产物的减少。这通常会导致一些本应该被扩增的产物没有出现。有一些商业化的试剂盒经过特别的设计,可以避免这种情况。

                               
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Real-time RT-PCR可以通过一步法或者两步法完成,两者各有优劣。一步法快速的流程,可以迅速的处理多个样本,并且易于实现自动化。操作步骤的减少提高了不同样本结果的可重复性,并且由于减少了操作,降低了样本被污染的风险。
这里艾美捷比较推荐Solis BioDyne的高灵敏度、高特异性、高稳定性的一步法多重PCR试剂盒-(基于探针),SOLIScript 1-step Multiplex Probe 试剂盒系列:如SOLIScript 1-step Multiplex Probe Kit   08-55-00250
SOLIScript™ 1-step Multiplex Probe Kit(一步法多重PCR试剂盒-基于探针)可在同一个管子中高特异性的执行cDNA合成与基于探针的qPCR反应。更多优点如下:

                               
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1.卓越的特异性:独家改造的耐热型逆转录酶,cDNA合成高达60℃。
2.多重反应(高通量):一个反应可同时分析1-4个靶标。
3.反应体系配置,无需冰块:专利的蛋白稳定技术,即使室温保存有效期高达30天。
4.无惧高GC含量PCR:独家优化的buffer配方。
5.预防交叉污染:内含dUTP,可匹配尿嘧啶糖苷酶(UNG)使用。
6.广泛的设备兼容性:
试剂盒组分:
1.5x One-step Multiplex Probe Mix:
HOT FIREPol® DNA聚合酶,反应缓冲液, dNTPs(含dUTP), 15 mM MgCl2 (终浓度为3 mM MgCl2)
2.40x One-step SOLIScript Mix:
SOLIScript逆转录酶, RiboGrip RNase Inhibitor(RNase强效结合蛋白,抑制RNA降解)
3.Water(无核酸酶)
可靠的实验结果展示:

                               
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对提取的人来源的总RNA进行5个浓度梯度的10倍稀释(每个反应:4000pg/ul - 0.4pg/ul),各浓度样品均使用Solis BioDyne的一步法多重PCR试剂盒,同时分析4个靶标。PCR仪器为:Applied BioSystems™ QuantStudio™ 6 cycler。


                               
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