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[试剂耗材] 如何提取纯化白细胞中的RNA?

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发表于 2019-4-12 18:11:39 | 显示全部楼层 |阅读模式
白细胞(WBC),旧称白血球,是人体血液中非常重要的一类血细胞。白细胞在人体中担负许多重任,它具有吞噬异物并产生抗体的作用,机体伤病的损伤治愈能力,抗御病原体入侵的能力,对疾病的免疫抵抗力等。

                               
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白细胞是人体与疾病斗争的"卫士"。当病菌侵入人体体内时,白细胞能通过变形而穿过毛细血管壁,集中到病菌入侵部位,将病菌包围、吞噬。在血液中白细胞的数目往往是一个健康与否的指标,因此,白细胞计数是一个重要血常规检查的项目。白细胞数量增加超过上限称为白细胞增多症,常见于急性细菌性感染、严重组织损伤、大出血、中毒和白血病等。白细胞数量降低低于下限称为白细胞减少症,常见于病毒感染、免疫系统衰弱、放化疗的影响。
如何提取纯化白细胞中的RNA?艾美捷比较推荐Norgen Biotek白细胞RNA提取纯化试剂盒。如Leukocyte RNA Purification Kit  21200 其特点和优势如下:
1. 用提供的RBC裂解缓冲液在几分钟内分离来自全血的白细胞;
2. 分离总RNA,包括microRNA,不含苯酚或氯仿;
3. 处理多达3 mL的血液并将白细胞RNA浓缩至10至20μL;
4. 操作快速方便;
5. 纯化的RNA可用于任何下游应用,包括RT-PCR,qRT-PCR,NGS,微阵列等。
各品牌横向对比
通过毛细管凝胶电泳证明Norgen的白细胞RNA纯化试剂盒分离的RNA的质量。从200μL仓鼠血液中分离总RNA,并在Agilent Lab-On-A-Chip上分离RNA时,可以观察到所有RNA种类,包括microRNA,18S rRNA和28S rRNA。相比之下,竞争对手的试剂盒未能纯化小RNA种类。更重要的是,Norgen的试剂盒产生的RNA样品的产量和纯度高于竞争对手试剂盒。

                               
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PS:通过对比Norgen样品,可以看出竞争对手样品中两个主要rRNA条带之间缺少额外峰。相反,由于RNA降解,竞争对手样品在rRNA条带之间具有额外的峰。
为了评估纯化的RNA的生物活性,Norgen厂家进行了RT-qPCR测试。使用Norgen的白细胞RNA提取纯化试剂盒和竞争对手的试剂盒对比,从200μL的仓鼠血液中分离总RNA。然后将纯化的RNA用作RT-qPCR反应中的模板,用于检测β-actin基因或miR-21。可以看出Norgen试剂盒分离的小RNA成功扩增miR-21转录物。但竞争对手的试剂盒未能纯化microRNA,这可以通过缺乏扩增来证明。 Norgen的试剂盒不仅可以分离大RNA,还可以分离microRNA,表明分离的RNA种类的多样性。这进一步表明,所分离的所有RNA种类都具有高纯度并保留了其生物活性。(蓝色为Norgen的样品,红色为市场上领先的竞争对手样品)

                               
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白细胞RNA提取纯化试剂盒精彩文章鉴赏:
1. MicroRNA molecular profiling from matched tumor and bio-fluids in bladder cancer.Molecular Cancer. 2015.
2. Novel Noncompetitive IL-1 Receptor-Biased Ligand Prevents Infection- and Inflammation-Induced Preterm Birth.Journal of Immunology. 2015.
3. Enhanced antioxidant capacity and anti-ageing biomarkers after diet micronutrient supplementation.Molecules. 2014.
4. Increased Il-4 Mrna expression and poly-aromatic hydrocarbon concentrations from children with asthma.BMC Pediatrics.2014
5. Targeted Inhibition of Serotonin Type 7 (5-HT7) Receptor Function Modulates Immune Responses and Reduces the Severity of Intestinal Inflammation.Journal of Immunology.2013

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