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呼吸道常见病毒的临床表现及实验室诊断

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发表于 2015-7-20 09:02:04 | 显示全部楼层 |阅读模式

  呼吸道病毒是指以呼吸道为主要传播途径,能引起儿童呼吸系统及全身感染的一些病毒。目前已证实,95%的儿童急性上呼吸道疾病和大部分下呼吸道疾病是由细菌以外的病原引起,其中以呼吸道病毒最常见,主要包括流感病毒、副流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、冠状病毒、风疹病毒、腺病毒和疱疹病毒等。据统计,儿童每年平均患急性呼吸道病毒感染2~7次。


      【病毒特征及临床表现】


      流感病毒(Flu)属单链RNA病毒,可分为甲型(A)、乙型(B)和丙型(C)。流行高峰在冬春季,潜伏期1~3天,患儿发病突然,年幼儿常见高热惊厥,多出现咳嗽、呕吐等症状,常并发肺炎及支气管炎。


      人类副流感病毒(PIV)是单链RNA病毒.共分4型,1型是与哮喘相关的病原,6个月至3岁为多发年龄;2型PIV感染较少见且很少发生严重疾病.3型PIV传染性较大,4型PIV感染仅有轻度呼吸道症状。


      呼吸道合胞病毒(RSV)基因是一个负链RNA,是世界范围内婴幼儿病毒性下呼吸道感染最重要的病毒病原。毛细支气管炎发病率在2月龄的婴儿中最高,6个月~12个月的要儿RSV肺炎的发生率最高,3岁以后小儿RSV感染时,毛细支气管炎已较少见。每年45%~50%住院婴幼儿毛细支气管炎是由RSV直接感染所致。


      腺病毒(ADV)属于DNA病毒,有100多个型别。腺病毒肺炎是婴幼儿期危害较大的疾病,潜伏期平均4~6天,其临床特点是高热且持续时间长,有明显的神经系统症状,呼吸困难,但肺部体征出现较晚,全身各系统均可受累。约80%的腺病毒肺炎发生在6个月至2岁的小儿,年长儿病情较轻,或仅表现为上呼吸道感染的症状。


      麻疹是由麻疹病毒(MV)引起的以发热、呼吸道卡他症状和出疹为主的急性传染病,广泛流行于全世界。肺炎是麻疹最常见的并发症,约占10%或稍多,大多见于出疹期。麻疹病毒只有一个血清型,6个月至5岁儿童发病率最高,病后免疫力持久。


      流行性腮腺炎是由腮腺炎病毒(MUMPS)所致的急性呼吸道传染病,以腮腺的非化脓性肿胀和疼痛为特征,传播途径主要为通过唾液飞沫吸人。腮腺炎病毒的基因组为单股负链RNA,只有一个血清型。1~2岁儿童腮腺炎病毒感染主要表现为呼吸道和肺部症状,冬春两季的发病人数要多于夏季。


      【实验室诊断】


      1.病毒分离及鉴定(以RSV为例)


      (1)操作程序:用负压吸取患儿鼻咽深部分泌物1~2ml,加入PBS2~3ml,用吸管反复吹打至分泌物完全混匀,2000rpm离心10分钟,弃去上清、沉淀物再次做上述处理,用上清液接种于Hep-2或MDCK细胞,在含有2%牛血清的MEM培养基中生长,33℃旋转培养,连续观察细胞变化,出现特征性融合病变者为阳性;若盲传3代仍无病变出现,则确定为阴性。


      (2)方法学评价:该法虽然特异性较强,但试验周期时间长,一般1~2周才能有结果,且成本较高,如果传代细胞不敏感,或存在细菌、支原体混合感染等情况,会导致病毒分离的阳性率低,标本内病毒含量少时亦会出现假阴性结果,因此临床不作为常规检测使用。


      2.间接法ELISA(以麻疹病毒IgM为倒)


      (1)实验原理:间接法HLISA主要用于检测抗体,它是将已知抗原包被在固相载体,加上待测抗体的标本,最后用酶标抗抗体间接的将其检出。


      (2)操作程序:①稀释标本将血清标本用稀释液1:100倍稀释,放置15分钟后加入酶标板中,每次实验加入阴、阳性对照及空白对照各一孔,每孔100μl,室温30分钟;②洗板4次,在吸水纸上拍干;③加入酶标记物,每孔100μl,室温30分钟;④重复步骤②;⑤人底物液,每孔l00μl,室温避光15分钟显色;⑥加入终止液,每孔100μl,以450nm波长测量其OD值;⑦结果判断:临界值=阳性对照值×0.2+阴性对照值


      标本OD值&lt临界值×0.85,判为阴性结果,标本OD值&gt临界值×1.15,判为阳性结果,介于二者之间为可疑值,应于7~14日后重新采集新鲜样品检测。


      3.注意事项


      (1)检测IgM抗体时,因试荆盒提供的稀释液中已经含有类风湿因子(RF)吸附剂,可去除RF的干扰,但稀释后必须放置15分钟以上或4℃过夜,加样时应吸取上清层,不要吸到沉淀物。


      (2)间接法ELISA可用于检测麻疹病毒IgM/IgG,腮腺炎病毒IgM/IgG,及腺病毒IgM等。此方法适合于回顾性诊断或做流行病学调查,对早期诊断意义有限。


      (3)小婴儿免疫反应较差,RSV抗体升高较慢,恢复期也见不到4倍以上升高,因此ELISA法检测RSV抗体不用于临床诊断。


      4.临床意义患儿感染麻疹病毒后,出疹3天内75%可检测出IgM抗体,7~14天IgM达到高峰,一般一个月后IgM明显下降,2~3个月内完全消失。IgG抗体常与IgM抗体同时或稍晚出现,25~30天达更高,6个月内下降2~4倍.以后下降缓慢,维持在一定水平。所以在出疹后3天至一个月内检测患儿血清IgM抗体,可为临床医生确定其病原提供依据,发病后7~14天内用ELISA法检测MV-IgM抗体阳性率最高。


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发表于 2015-7-21 10:08:52 | 显示全部楼层
楼主给的东西挺实用的
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